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診狀

可能的原因

解 決 方 法

(一)

保留時(shí)間變化

1.柱溫變化

柱恒溫

2.等度與梯度間未能充分平衡

至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱

3.緩沖液容量不夠

用>25mmol/L的緩沖液

4.柱污染

每天沖洗柱

5.柱內(nèi)條件變化

穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相

6.柱快達(dá)到壽命

采用保護(hù)柱

(二)

保留時(shí)間縮短

1.流速增加

檢查泵,重新設(shè)定流速

2.樣品超載

降低樣品量

3.鍵合相流失

流動(dòng)相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向

4.流動(dòng)相組成變化

防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀

5.溫度增加

柱恒溫

(三)

保留時(shí)間延長

1.流速下降

管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡

2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化

用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱

3.鍵合相流失

同前(二)3

4.流動(dòng)相組成變化

同前(二)4

5.溫度降低

同前(二)5

(四)

出現(xiàn)肩峰或分叉

1.樣品體積過大

用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%

2.樣品溶劑過強(qiáng)

采用較弱的樣品溶劑

3.柱塌陷或形成短路通道

更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件

4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效

更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品

5.進(jìn)樣器損壞

更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子

(五)

鬼峰

1.進(jìn)樣閥殘余峰

每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗

2.樣品中未知物

處理樣品

3.柱未平衡

重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離子對(duì)色譜)

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)

每天新配,用抗氧化劑

5.水污染(反相)

通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量

(六)

基線噪聲

1.氣泡(尖銳峰)

流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓

2.污染(隨機(jī)噪聲)

清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑

3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲

更換氘燈

4.電干擾(偶然噪聲)

采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)

5.檢測(cè)器中有氣泡

流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓

(七)

峰拖尾

1.柱超載

降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相

2.峰干擾

清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相

3.硅羥基作用

加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品

4.同前(四)4

同前(四)4

5.同前(四)3

5.同前(四)3

6.死體積或柱外體積過大

連接點(diǎn)降至最低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管

7.柱效下降

用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱

(八)

峰展寬

1.進(jìn)樣體積過大

同(四)1

2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展

進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散

3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢

設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)

4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過大

設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%

5.流動(dòng)相粘度過高

增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相

6.檢測(cè)池體積過大

用小體積池,卸下熱交換器

7.保留時(shí)間過長

等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫

8.柱外體積過大

將連接管徑和連接管長度降至最小

9.樣品過載

進(jìn)小濃度小體積樣品