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您所在的位置：首頁 > 實(shí)驗(yàn)百科 > 細(xì)胞破碎技術(shù)的非機(jī)械法詳解

時(shí)間:2021-7-22 13:58:51作者:admin

細(xì)胞破碎技術(shù)目前已發(fā)展了多種

，以便適應(yīng)不同用途和不同類型的細(xì)胞壁破碎

。破碎方法可規(guī)納為機(jī)械法和非機(jī)械法兩大類

。如下介紹的是非機(jī)械法的分類：

1：化學(xué)破碎法
采用化學(xué)法處理可以溶解細(xì)胞或抽提胞內(nèi)組分

。常用酸

、堿

、表面活性劑和有機(jī)溶劑等化學(xué)試劑

2：去垢劑破碎法
蛋白質(zhì)復(fù)性利用包含體與細(xì)胞碎片的密度差，用離心法將包含體與細(xì)胞碎片和可溶性蛋白質(zhì)分開

，獲得了干凈的包含體

，再對(duì)包含體溶解復(fù)性。這樣首先就擺脫了大量的雜蛋白

、核酸

、熱原、內(nèi)毒素等雜質(zhì)

，使后面的分離純化簡(jiǎn)單了

。從這個(gè)角度上講，包含體的形成對(duì)分離純化亦有好處。

3：酶溶破碎法
酶解是利用溶解細(xì)胞壁的酶處理菌體細(xì)胞

，使細(xì)胞壁受到部分或完全破壞后，再利用滲透壓沖擊等方法破壞細(xì)胞膜

，進(jìn)一步增大胞內(nèi)產(chǎn)物的通透性

。溶菌酶（lysozyme)適用于革蘭氏陰性菌細(xì)胞的分解，應(yīng)用于革蘭氏陽性菌時(shí)

，需輔以EDTA使之更有效地作用于細(xì)胞壁

。真核細(xì)胞的細(xì)胞壁不同于原核細(xì)胞，需采用不同的酶

。

4：滲透壓沖擊破碎法
滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法

，將細(xì)胞放在高滲透壓的溶液中（如一定濃度的甘油或蔗糖溶液），由于滲透壓的作用

，細(xì)胞內(nèi)水分便向外滲出

，細(xì)胞發(fā)生收縮，當(dāng)達(dá)到平衡后

，將介質(zhì)快速稀釋

，或?qū)⒓?xì)胞轉(zhuǎn)入水或緩沖液中，由于滲透壓的突然變化

，胞外的水迅速滲入胞內(nèi)

，引起細(xì)胞快速膨脹而破裂。

5：凍融破碎法
將細(xì)胞放在低溫下冷凍（約-15℃）

，然后在室溫中融化

，反復(fù)多次而達(dá)到破壁作用。由于冷凍

，一方面能使細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂

，從而增加細(xì)胞的親水性能，另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶

，形成冰晶粒

，引起細(xì)胞膨脹而破裂。對(duì)于細(xì)胞壁較脆弱的菌體

，可采用此法

。