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              細(xì)胞破碎儀的機(jī)械破碎技術(shù)

              時(shí)間:2021-7-22 13:59:27作者:admin

              細(xì)胞破碎儀的破碎技術(shù)是怎樣的?

              在生物產(chǎn)物的分離提取中

              ,如果目標(biāo)物質(zhì)為胞外產(chǎn)物(如霉菌產(chǎn)生的糖化酶等),其提取過程較簡(jiǎn)單
              ,只需直接進(jìn)行固液分離
              ,獲得澄清的濾液,再進(jìn)行分離純化操作
              ;如果目標(biāo)物質(zhì)為胞內(nèi)產(chǎn)物或多細(xì)胞生物組織中的各種生物分子(如堿性磷酸酶等胞內(nèi)酶
              、部分外源基因表達(dá)產(chǎn)業(yè)或植物細(xì)胞產(chǎn)物等),都需要事先將細(xì)胞或組織破碎
              ,使目標(biāo)物質(zhì)充分釋放到溶液中而且不失去生物活性


              不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織,其細(xì)胞破碎的難易程序不一
              ,使用的方法也不相同
              ,如動(dòng)物臟器的細(xì)胞膜較脆弱,容易破碎
              ,植物和微生物由于具有較堅(jiān)固的纖維素
              ,半纖維素組成的細(xì)胞壁,要采取專門的細(xì)胞破碎方法


              細(xì)胞破碎儀的破碎方法

              按照是否存在外加作用力
              ,細(xì)胞破碎儀的破碎方法可分為機(jī)械法和非機(jī)械法兩大類。機(jī)械破碎中細(xì)胞所受的機(jī)械作用力主要有壓縮力和剪切力
              ,非機(jī)械破碎主要利用化學(xué)或生化試劑(如酶)改變細(xì)胞壁或細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)而釋放胞內(nèi)物質(zhì)


              細(xì)胞破碎儀機(jī)械破碎法

              通過機(jī)械運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的剪切力的作用,使細(xì)胞破碎的方法稱為機(jī)械破碎法
              。機(jī)械破碎法是工業(yè)規(guī)模細(xì)胞破碎的主要手段
              ,具有處理量大,破碎效率高
              ,速度快等特點(diǎn)
              ,適用于植物材料和細(xì)菌細(xì)胞的破碎。按照所使用的破碎機(jī)械的不同
              ,可以分為搗碎法
              ,珠磨法,勻漿法和超聲波破碎法等


              1
              ,細(xì)胞破碎儀搗碎法。利用搗碎機(jī)高速旋轉(zhuǎn)葉片鎖產(chǎn)生的剪切力將組織細(xì)胞破碎
              ,是一種較劇烈的破碎細(xì)胞的方法
              。通�
              ?上扔眉矣檬称芳庸C(jī)將組織打碎,然后再用10000~20000r/min的內(nèi)刀式組織搗碎機(jī)(即高速分散器)將組織的細(xì)胞打碎
              ,為了防止發(fā)熱或升溫過高
              ,通常是轉(zhuǎn)10~20s,停10~20s
              ,可反復(fù)多次


              搗碎法適用于動(dòng)物組織,內(nèi)臟
              ,植物種子
              ,嫩菜葉,較柔軟的果蔬等材料的破碎
              。但由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械剪切力較大且破碎過程中溫度易迅速上升
              ,不適于核酸等生物大分子的提取。

              2
              ,細(xì)胞破碎儀琢磨法
              。琢磨是一種常用的機(jī)械破碎細(xì)胞的方法,將玻璃小珠與細(xì)胞懸浮液一起快速攪拌
              。由于研磨作用
              ,使細(xì)胞獲得破碎,常用的工業(yè)設(shè)備是高速珠磨機(jī)
              。該法適用于絕大多數(shù)微生物細(xì)胞的破碎
              。如采用高速濕法珠磨分離純化重組人腫瘤壞死因子時(shí),菌體經(jīng)間歇式珠磨機(jī)破碎3min
              ,玻璃珠直徑為0.25~0.50mm
              ,裝珠量為破碎室總體積的85%,攪拌轉(zhuǎn)速1500r/min
              ,破碎液于4攝氏度
              ,15000r/min離心15min后去除細(xì)胞碎片。本條件下
              ,目標(biāo)蛋白回收率可達(dá)90.3%
              ,活性回收率為85.8%。

              3
              ,細(xì)胞破碎儀高壓勻漿法。高壓勻漿破碎又稱高壓剪切破碎法
              。其破碎原理是:細(xì)胞懸浮液在高壓作用下從閥座與閥之間的環(huán)隙高速噴出后撞擊到碰撞環(huán)上

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